正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔ShameikMoore配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩ChrisPine配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔LievSchreiber配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊JakeM.Johnson配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。他们合力与恶势力展开斗争……

彼得从未放弃寻找生死未卜的妹妹。他在市集碰见一名算命师，算命师告诉他，只要找到一头神秘的大象，以及能够变出大象的魔术师，自然就会知道妹妹的下落。为了完成三项不可能的任务，彼得踏上一场曲折揪心的旅程，如果他真的成功了，影响的不只是他的人生，他所居住的小镇也将永远改变。影片改编自二度荣获纽伯瑞儿童文学奖的作家凯特·迪卡米洛的同名小说。